13.7  Thö v« khuÈn

Qui ®Þnh chung

Kü thuËt nµy ¸p dông ®Ó thö v« khuÈn nh»m ph¸t hiÖn sù cã mÆt cña vi khuÈn, nÊm mèc vµ nÊm men trong c¸c nguyªn liÖu, chÕ phÈm vµ dông cô mµ theo tiªu chuÈn riªng cÇn ph¶i v« khuÈn. Thö v« khuÈn ph¶i ®­îc tiÕn hµnh trong ®iÒu kiÖn v« khuÈn nh­ trong  buång thæi khÝ v« khuÈn hoÆc trong buång s¹ch ®Ó mÉu thö kh«ng bÞ « nhiÔm. Trong qu¸ tr×nh thö, mÉu kh«ng ®­îc tiÕp xóc víi c¸c t¸c nh©n cã ¶nh h­ëng ®Õn vi khuÈn, nÊm mèc, nÊm men (nh­: tia tö ngo¹i, chÊt s¸t khuÈn, nhiÖt ®é cao ...). C¸c dông cô, dung m«i, m«i tr­êng nu«i cÊy ph¶i ®­îc diÖt khuÈn tr­íc khi dïng.

Ph­¬ng ph¸p thö

Nguyªn t¾c

NÕu vi khuÈn, nÊm mèc, nÊm men ®­îc cÊy vµo m«i tr­êng cã chÊt dinh d­ìng vµ n­íc, ®­îc gi÷ ë ®iÒu kiÖn nhiÖt ®é thÝch hîp th× chóng sÏ ph¸t triÓn. Sù cã mÆt cña  vi sinh vËt lµm cho m«i tr­êng biÕn ®æi tr¹ng th¸i tõ trong sang ®ôc, hoÆc cã cÆn l¾ng ë ®¸y m«i tr­êng, hoÆc thay ®æi mµu s¾c m«i tr­êng.

Chän mét trong hai ph­¬ng ph¸p thö th­êng dïng lµ ph­¬ng ph¸p mµng läc hoÆc ph­¬ng ph¸p cÊy trùc tiÕp. Khi tiÕn hµnh thö ph¶i lµm s¹ch bÒ ngoµi cña èng (hoÆc chai, lä, b×nh ...) ®ùng chÕ phÈm b»ng mét chÊt s¸t khuÈn thÝch hîp. Sau ®ã lÊy mét l­îng chÕ phÈm ®ñ dïng theo qui ®Þnh, cÊy trùc tiÕp vµo m«i tr­êng (nÕu theo ph­¬ng ph¸p cÊy trùc tiÕp) hoÆc theo ph­¬ng ph¸p mµng läc: §em chÕ phÈm sau khi ®· ®­îc hoµ lo·ng víi dung m«i thÝch hîp läc qua  mµng läc, råi c¾t c¸c mµng läc thµnh miÕng nhá ®em nhóng vµo m«i tr­êng, ñ m«i tr­êng ®· cÊy chÕ phÈm hoÆc cÊy mµng läc trong thêi gian qui ®Þnh.

ChuÈn bÞ m«i tr­êng vµ dung m«i

M«i tr­êng ®Ó ph¸t hiÖn vi khuÈn hiÕu khÝ vµ kþ khÝ

M«i tr­êng thioglycolat cã th¹ch (dïng cho thö nghiÖm nh÷ng chÕ phÈm láng vµ trong).

M«i tr­êng thioglycolat kh«ng cã th¹ch (dïng cho thö nghiÖm nh÷ng chÕ phÈm ®Æc hoÆc ®Æc sÒn sÖt d¹ng cao).

M«i tr­êng Soybean - casein (®Ó ph¸t hiÖn vi khuÈn hiÕu khÝ vµ nÊm mèc)

C¶ hai lo¹i m«i tr­êng trªn ph¶i ®­îc pha chÕ vµ kiÓm tra chÊt l­îng theo ®óng qui ®Þnh ë môc "C¸ch pha chÕ vµ kiÓm tra chÊt l­îng c¸c m«i tr­êng" tr­íc khi dïng.

Dung m«i dïng ®Ó hoµ lo·ng

Khi nh÷ng mÉu thö kh«ng ë d¹ng dung dÞch láng, cÇn hoµ lo·ng ®Ó thö nghiÖm. ChØ ®­îc dïng lµm dung m«i hoµ lo·ng lµ mét chÊt láng bÊt kú kh«ng cã tÝnh kh¸ng khuÈn vµ kh«ng t¸c ®éng ®Õn ®é xèp cña mµng läc. Th­êng dïng c¸c dung m«i sau ®©y:

Dung m«i A: Hoµ tan 1 g  pepton vµo n­íc cho võa ®ñ 1 lÝt. Läc (hoÆc ly t©m) cho trong. §iÒu chØnh pH b»ng 7,1 ± 0,2. §ùng vµo nhiÒu b×nh, mçi b×nh kho¶ng 100 ml. HÊp ë 121⁰ C trong 18 - 20 phót.

Dung m«i B: Nh­ dung m«i A, nh­ng thªm 1 ml polysorbat 80 cho 1 lÝt dung m«i, dïng ®Ó hoµ lo·ng nh÷ng chÕ phÈm thö cã lecithin.

Dung m«i  C:  isopropyl myristat

Dïng ®Ó pha lo·ng nh÷ng chÕ phÈm d¹ng dÇu hay dung dÞch dÇu.

 

TiÕn hµnh thö theo ph­¬ng ph¸p mµng läc

Dông cô

C¸c dông cô dïng trong thö nghiÖm ph¶i ®¶m b¶o v« khuÈn gåm:

- C¸c èng nghiÖm hoÆc c¸c b×nh ®ùng m«i tr­êng.

- Bé läc gåm cã: PhÔu läc, gi¸ ®ì mµng läc, b×nh høng, vµ c¸c phô kiÖn ®Ó ghÐp nèi; hÖ thèng hót ch©n kh«ng.

- Mµng läc: Th­êng dïng lo¹i cã d­êng kÝnh lç läc kho¶ng 0,2 - 0,45 mm. Lo¹i mµng Cellulose nitrat ®­îc dïng cho c¸c chÕ phÈm d¹ng n­íc, d¹ng dÇu vµ c¸c dung dÞch cã l­îng cån thÊp ®é. Lo¹i mµng läc d¹ng cellulose acetat ®­îc dïng cho c¸c chÕ phÈm d¹ng cã nång ®é cån cao. §Æc biÕt ®èi víi c¸c chÕ phÈm kh¸ng sinh cÇn ph¶i chän lo¹i mµng läc thÝch hîp ®¶m b¶o kh«ng cßn d­ l­îng kh¸ng sinh trªn mµng sau khi läc.

- KÐo c¾t mµng läc.

L­îng  mÉu thö cÇn dïng cho mét lÇn thö nghiÖm

Tuú theo tõng lo¹i mÉu thö, lÊy sè l­îng thÝch hîp theo qui ®Þnh ë b¶ng 1.

 

B¶ng 1.

 

STT	Lo¹i mÉu thö	L­îng tèi thiÓu chÕ phÈm cÇn lÊy
1               2       3	Dung dÞch thuèc tiªm cã chøa trong mét ®¬n vÞ ®ãng gãi: - D­íi                         1 ml - Cã tõ 1 ®Õn Ýt h¬n     4 ml - Cã tõ 4 ®Õn Ýt h¬n   20 ml - Cã tõ 20 ®Õn         100 ml - Lín h¬n                100 ml   Dung dÞch thuèc nhá m¾t vµ c¸c chÕ phÈm láng kh«ng tiªm     Nh÷ng mÉu thö lµ chÊt r¾n, dÞch treo, nhò dÞch, kem, hoÆc thuèc mì.	Toµn bé mét ®¬n vÞ ®ãng gãi 1/2 ®¬n vÞ ®ãng gãi 2     ml 2 - 10 ml 1/2 ®¬n vÞ ®ãng gãi   5 - 10 ml cña dung dÞch ®· hoµ lo·ng ®Õn 10 lÇn (tt/tt) b»ng dung m«i thÝch hîp nªu ë (môc c)   0,5 - 1 g mÉu thö ®· ®­îc hoµ lo·ng thµnh dung dÞch víi tØ lÖ 1% (kl/tt) b»ng dung m«i thÝch hîp (nªu ë môc dung m«i dïng ®Ó hoµ lo·ng)

 

Kü thuËt thö

Dïng dung m«i A võa ®ñ ®Ó thÊm ­ít mµng läc. Rãt lªn mµng läc mét l­îng mÉu cÇn thö nh­ qui ®Þnh ë b¶ng 1. Dïng m¸y hót ch©n kh«ng ®Ó rót ng¾n thêi gian läc. Röa mµng läc Ýt nhÊt 3 lÇn, mçi lÇn dïng 100 ml dung m«i thÝch hîp, v« khuÈn. LÊy mµng läc ra khái gi¸ ®ì trong phÔu läc. CÊy mµng läc vµo m«i tr­êng b»ng nhóng ch×m vµo lo¹i m«i tr­êng ®Ó ph¸t hiÖn nÊm hoÆc vi khuÈn (môc chuÈn bÞ m«i tr­êng vµ dung m«i ).

Khi mÉu thö cã tÝnh kh¸ng khuÈn, röa mµng läc Ýt nhÊt ba lÇn b»ng c¸ch läc qua mµng dung m«i tiÖt trïng ®· chän dïng cho thö nghiÖm.Lµm thÝ nghiÖm kiÓm tra ®Ó biÕt ch¾c ch¾n kh«ng cßn t¸c dông kh¸ng khuÈn cña mÉu thö hÊp thô trªn mµng. ChuyÓn toµn bé mµng läc vµo m«i tr­êng nu«i cÊy thÝch hîp ®Ó ph¸t hiÖn vi khuÈn, nÊm mèc.

NÕu kh«ng cã chØ dÉn trong chuyªn luËn riªng, ñ m«i tr­êng thyoglycolat ë 30⁰C ®Õn 35⁰C vµ ñ m«i tr­êng  soybean - casein ë 20⁰C ®Õn 25⁰C  Ýt nhÊt 14 ngµy.

NÕu mÉu thö lµ dông cô (bé d©y truyÒn, tói läc m¸u...) th× dïng 100 ml dung m«i B cho ch¶y qua dông cô. Høng lÊy dung m«i, rãt lªn mµng läc ®· ®­îc thÊm ­ít b»ng dung m«i A, råi lµm tiÕp theo kü thuËt ghi ë môc kü thuËt thö.

TiÕn hµnh thö theo ph­¬ng ph¸p cÊy trùc tiÕp

Dông cô:

C¸c dông cô dïng cho thö nghiÖm ®Òu ph¶i ®¶m b¶o v« khuÈn míi ®­îc sö dông vµo thö nghiÖm. Dông cô dïng cho ph­¬ng ph¸p cÊy trùc tiÕp gåm: B¬m tiªm, pipet, c¸c èng nghiÖm hoÆc c¸c b×nh ®ùng m«i tr­êng.

L­îng chÕ phÈm cÇn dïng ®Ó thö nghiÖm

Tuú theo tõng lo¹i mÉu thö, lÊy l­îng chÕ phÈm thÝch hîp theo qui ®Þnh ë b¶ng 2.

Kü thuËt thö

Dïng b¬m tiªm hoÆc pipet lÊy mÉu thö cÊy vµo hai lo¹i m«i tr­êng theo sè liÖu ë b¶ng 2. NÕu mÉu thö lµ chÊt r¾n th× cÊy trùc tiÕp vµo m«i tr­êng vµ chó ý l¾c ®Ó mÉu thö ph©n t¸n ®Òu trong m«i tr­êng. NÕu kh«ng cã chØ dÉn ë chuyªn luËn riªng th× ñ m«i tr­êng ph¸t hiÖn vi khuÈn ë 30⁰C - 35⁰C ; ñ m«i tr­êng ph¸t hiÖn nÊm mèc ë 20⁰C - 25⁰C, thêi gian Ýt nhÊt 14 ngµy; th­êng xuyªn theo dâi c¸c m«i tr­êng ®· cÊy. NÕu chÕ phÈm lµm ®ôc m«i tr­êng, ®Ó cã thÓ dÔ dµng quan s¸t sù mäc cña vi khuÈn, sau khi ñ m«i tr­êng 3 - 7 ngµy nªn chuyÓn mét phÇn nhá m«i tr­êng nµy sang mét lo¹t m«i tr­êng míi cïng lo¹i. TiÕp tôc ñ c¸c èng m«i tr­êng ®· cÊy l¹i Ýt nhÊt 7 ngµy.

Tr­êng hîp mÉu thö lµ b¨ng, g¹c, chØ kh©u phÉu thuËt: NÕu kÝch th­íc vµ h×nh d¹ng cho phÐp, nhóng toµn bé mÉu thö vµo 100 ml m«i tr­êng t­¬ng øng. Khi mÉu thö lµ dông cô (d©y truyÒn, èng läc m¸u, ...) th× dïng dung m«i A hoÆc B (môc chuÈn bÞ m«i tr­êng vµ dung m«i) cho ch¶y qua ®Ó thu ®­îc Ýt nhÊt 15 ml dÞch röa, cÊy vµo Ýt nhÊt 100 ml mçi lo¹i m«i tr­êng nu«i cÊy. ñ vµ ®äc kÕt qu¶ nh­ ®· ghi ë trªn.

B¶ng 2

STT	Lo¹i mÉu thö	L­îng  tèi thiÓu chÕ phÈm cÇn lÊy	ThÓ tÝch tèi thiÓu m«i tr­êng cÇn lÊy	Ghi chó
1	MÉu thö lµ chÊt láng chøa trong mét ®¬n vÞ ®ãng gãi lo¹i: D­íi 1 ml Tõ  1 ml  ®Õn Ýt h¬n 5 ml Tõ  5 ml  ®Õn Ýt h¬n 20 ml Tõ 20 ml  ®Õn  Ýt h¬n 50 ml Tõ 50 ml  ®Õn 100 ml	Toµn bé ®¬n vÞ ®ãng gãi 1/2 ®¬n vÞ ®ãng gãi   2  ml   5  ml 10  ml	15 ml 15 ml 20 ml 40 ml 80 ml	NÕu mÉu thö lµ dÇu hay dung dÞch dÇu ph¶i thªm vµo m«i tr­êng 1% polyethoxy- ethanol  hoÆc 1% polysorbat ®Ó nhò ho¸.
2	MÉu thö lµ chÊt r¾n, thuèc mì hay kem, chøa trong mét ®¬n vÞ ®ãng gãi lo¹i: D­íi 50 mg   Tõ  50 mg ®Õn  200 mg   Lín h¬n 200 mg	Toµn bé 1 ®¬n vÞ ®ãng gãi   1/2 khèi l­îng cña 1 ®¬n vÞ ®ãng gãi 100 mg	40 ml   80 ml   80 ml	NÕu mÉu thö lµ thuèc mì hay kem th× cÇn hoµ lo·ng víi dung m«i B theo tû lÖ 1/10 (kt/tt) tr­íc khi cÊy vµo m«i tr­êng.

 

 

Theo dâi vµ ®¸nh gi¸ kÕt qu¶

Trong suèt thêi gian ñ, hµng ngµy ph¶i quan s¸t c¸c m«i tr­êng ®· cÊy mµng läc hoÆc mÉu thö . NÕu kh«ng thÊy cã vi khuÈn, nÊm mèc mäc trong suèt thêi gian qui ®Þnh, mÉu thö ®­îc coi lµ ®¹t tiªu chuÈn v« khuÈn.

NÕu cã tõ 1 trë lªn trong sè c¸c m«i tr­êng nu«i cÊy, cã vi khuÈn hoÆc nÊm mèc mäc, cÇn ph¶i:

Rµ so¸t l¹i qui tr×nh thö.

Thö l¹i c¸c mÉu thö nghi ngê.

Gi÷ l¹i c¸c m«i tr­êng cã vi khuÈn, nÊm mèc mäc.

TiÕn hµnh ph©n lËp, so s¸nh vi khuÈn hoÆc nÊm trªn m«i tr­êng, cÊy l¹i víi vi khuÈn hoÆc nÊm ®· mäc ë m«i tr­êng cò.

NÕu trªn tiªu b¶n ph©n lËp, vi khuÈn (hoÆc nÊm mèc) gièng víi tiªu b¶n lµm lÇn ®Çu, mÉu thö  ®­îc coi lµ kh«ng ®¹t tiªu chuÈn v« khuÈn.

NÕu trªn tiªu b¶n ph©n lËp, vi khuÈn (hoÆc nÊm mèc) kh¸c biÖt so víi lÇn thÝ nghiÖm ®Çu tiªn, cÇn thùc hiÖn phÐp thö lÆp l¹i víi sè l­îng mÉu gÊp ®«i. NÕu kh«ng ph¸t hiÖn thÊy vi khuÈn (hoÆc nÊm mèc), mÉu thö ®­îc coi lµ ®¹t tiªu chuÈn v« khuÈn. NÕu vÉn thÊy vi khuÈn (hoÆc nÊm) mäc ë lÇn lÆp l¹i nµy, mÉu thö ®­îc coi lµ kh«ng ®¹t tiªu chuÈn v« khuÈn.

C¸ch pha chÕ vµ kiÓm tra chÊt l­îng c¸c m«i tr­êng

M«i tr­êng ®Ó ph¸t hiÖn c¸c vi khuÈn hiÕu khÝ vµ kþ khÝ

M«i tr­êng thioglycolat: Dïng cho thö nghiÖm nh÷ng chÕ phÈm láng vµ trong

L - Cystin                                                            Natri clorid                                                        Dextrose (C6H12O6.H2O)                         Th¹ch bét (cã ®é Èm nhá h¬n 15%)                  Cao men bia (cã kh¶ n¨ng tan trong n­íc) Casein pancreatic      Natri thioglycolat                   (hoÆc acid thioglycolic 0,3 g ) Resazurin (dung dÞch 0,1% míi pha)                  N­íc cÊt                                                         pH sau khi tiÖt khuÈn:  7,1 ± 0,2

0,50 g 2,50 g 5,50 g 0,75 g  5,00 g 15,00 g 0,50 g   1,0 ml 1000 ml

Trén tÊt c¶ c¸c thµnh phÇn theo thø tù ®· ghi ë trªn (trõ resazurin vµ  thioglycolat) trong cèi nghiÒn, thªm vµo mét Ýt n­íc nãng, trén kü, chuyÓn sang dông cô thÝch hîp. Thªm sè n­íc cßn l¹i, ®un hçn hîp c¸ch thuû s«i ®Õn khi t¹o thµnh dung dÞch trong. Thªm  natri thioglycolat, dïng dung dÞch natri hydroxyd 1 N ®iÒu chØnh sao cho m«i tr­êng sau khi tiÖt khuÈn cã pH7,1 ± 0,2. §un nãng l¹i dung dÞch (tr¸nh ®un s«i). Läc (nÕu cÇn) qua giÊy läc ®· thÊm ­ít, råi thªm dung dÞch resazurin trén ®Òu. §ãng vµo c¸c èng nghiÖm (hoÆc b×nh) thÝch hîp, hÊp v« khuÈn ë 121⁰C trong 18 - 20 phót. LÊy ra lµm nguéi nhanh tíi 25⁰C, tiÕp tôc b¶o qu¶n ë nhiÖt ®é 20 - 30⁰C, tr¸nh ¸nh s¸ng. NÕu 1/3 thÓ tÝch phÝa trªn cña èng (hoÆc b×nh) m«i tr­êng cã mµu hång, m«i tr­êng kh«ng thÝch hîp ®Ó thö nghiÖm. Cã thÓ phôc håi l¹i m«i tr­êng b»ng c¸ch ®un c¸ch thuû cho mÊt mµu råi lµm l¹nh ®ét ngét. Nh­ng chØ sö dông m«i tr­êng ®· phôc håi nµy mét lÇn, kh«ng dïng m«i tr­êng phôc håi lÇn 2. C¸c m«i tr­êng thioglycolat láng chØ dïng trong kho¶ng 3 tuÇn.

M«i tr­êng thioglycolat kh«ng cã th¹ch

Dïng cho thö nghiÖm nh÷ng chÕ phÈm ®ôc hoÆc ®Æc sÒn sÖt d¹ng cao.

L. Cystin                                                             Natri clorid                                                        Dextrose (C6H12O6.H2O)                         Cao men bia (cã kh¶ n¨ng tan trong n­íc) Casein pancreatic Natri thioglycolat                                                             (hoÆc acid thioglycolic 0,3 g ) Resazurin (dung dÞch 1% míi pha)                  N­íc cÊt                                                         pH sau khi tiÖt khuÈn: 7,1± 0,2

0,50  g 2,50  g 5,50  g 5,00  g 15,0  g 0,50   g   10 ml 1000 ml

Cho tÊt c¶ c¸c thµnh phÇn trªn vµo mét dông cô thÝch hîp, ®un c¸ch thuû, khuÊy ®Òu ®Õn khi thµnh dung dÞch, dïng dung dÞch natri hydroxyd 1N  ®iÒu chØnh ®Ó cho pH sau khi tiÖt khuÈn ®¹t 7,1 ± 0,2. Cã thÓ läc (nÕu cÇn). Ph©n chia vµo c¸c èng nghiÖm (hoÆc b×nh) thÝch hîp. HÊp tiÖt khuÈn 121⁰C trong kho¶ng 18 - 20 phót. Sau khi tiÖt khuÈn ®em lµm nguéi nhanh tíi 25⁰C, m«i tr­êng kh«ng ®­îc ®un nãng trë l¹i.

M«i tr­êng ph¸t hiÖn vi khuÈn hiÕu khÝ vµ nÊm

M«i tr­êng Soybean - casein

Casein pancreatic                                     Bét papaic soybean                                    Natri clorid                                                Dikali hydrophosphat (K2HPO4)            Dextrose (C6H12O6.H2O)                         N­íc cÊt                                                  pH sau khi tiÖt khuÈn: 7,3 ± 0,2

17,0 g 3,0 g 5,0 g 2,5 g 2,5 g 1000 ml

Hoµ tan tÊt c¶ c¸c chÊt r¾n trong n­íc, ®un nãng nhÑ ®Ó cho tan hoµn toµn. §Ó nguéi ë nhiÖt ®é phßng. Dïng dung dÞch natri hydroxyd 0,1N ®Ó ®iÒu chØnh (nÕu cÇn) cho pH sau khi tiÖt khuÈn kho¶ng 7,1 ®Õn 7,5. Läc (nÕu cÇn) ®Ó cho m«i tr­êng trong. Ph©n chia vµo nh÷ng dông cô thÝch hîp, hÊp tiÖt khuÈn ë 121⁰C trong kho¶ng 20 phót.

KiÓm tra chÊt l­îng m«i tr­êng

a) §é v« khuÈn:

LÊy ngÉu nhiªn mét vµi èng (hoÆc b×nh) m«i tr­êng míi s¶n xuÊt, ®em ñ ë nhiÖt ®é 30 - 35⁰C trong 4 ngµy ®èi víi nh÷ng lo¹i m«i tr­êng dïng nu«i cÊy vi khuÈn hiÕu khÝ vµ kþ khÝ; ñ ë nhiÖt ®é 20 - 25⁰C  trong Ýt nhÊt 7 ngµy ®èi víi nh÷ng lo¹i m«i tr­êng dïng nu«i cÊy vi khuÈn, nÊm mèc. C¸c lo¹i m«i tr­êng ph¶i kh«ng ®­îc cã vi khuÈn, nÊm mèc mäc.

b) Kh¶ n¨ng dinh d­ìng:

CÊy vµo m«i tr­êng dïng ®Ó thÝ nghiÖm kho¶ng 100 tÕ bµo sèng cña nh÷ng lo¹i vi khuÈn sau:

Lo¹i hiÕu khÝ dïng Staphylococcus aureus  ATCC 6538.

Lo¹i vi khuÈn hiÕu khÝ cã nha bµo dïng Bacillus subtilis ATCC 6633.

Lo¹i vi khuÈn kþ khÝ dïng Clostridium sporogenes ATCC 9404.

Lo¹i nÊm dïng Candida albicans ATCC 10231.

                         Aspergillus niger ATCC 16404

Mçi lo¹i chñng chØ thÞ ®­îc cÊy vµo lo¹i m«i tr­êng t­¬ng øng, råi mang ñ ë nhiÖt ®é thÝch hîp cho tõng lo¹i Ýt nhÊt 3 ngµy ®èi víi vi khuÈn vµ Ýt nhÊt 5 ngµy ®èi víi  nÊm mèc. Trªn mçi lo¹i m«i tr­êng, sau thêi gian ñ ®Òu ph¶i thÊy vi khuÈn mäc tèt.

 

c) KiÓm tra t¸c dông øc chÕ ë  mÉu mang thö:

Mét sè chÕ phÈm do yªu cÇu cña s¶n xuÊt hoÆc ë nh÷ng chÕ phÈm míi ng­êi ta ®· cho thªm chÊt b¶o qu¶n. Lo¹i chÕ phÈm nµy cã ¶nh h­ëng ®Õn sù ph¸t triÓn cña vi khuÈn, nÊm mèc, nªn cÇn ph¶i kiÓm tra t¸c dông øc chÕ cña chóng ®èi víi vi khuÈn nÊm mèc.

§èi víi vi khuÈn kþ khÝ

Dïng 4 èng m«i tr­êng ph¸t hiÖn vi khuÈn kþ khÝ. Hai èng dïng lµm chøng chØ cÊy vµo mçi èng chøng nµy 100 nha bµo vi khuÈn kþ khÝ Clostridium sporogenes ATCC 9404 (kho¶ng 0,1 ml nhò dÞch nha bµo ®· pha lo·ng thÝch hîp). Hai èng cßn l¹i cÊy vµo mçi èng mét l­îng b»ng nhau chÕ phÈm cÇn kiÓm tra, råi còng cÊy vµo mçi èng 100 nha bµo Clostridium sporogenes ATCC 9404. §em ñ tÊt c¶ c¸c èng ë 30 - 35⁰C Ýt nhÊt 7 ngµy.

§èi víi vi khuÈn hiÕu khÝ

Dïng 4 èng m«i tr­êng ph¸t hiÖn vi khuÈn hiÕu khÝ. Hai èng dïng lµm chøng chØ cÊy vµo mçi èng chøng nµy 100 tÕ bµo vi khuÈn hiÕu khÝ Staphylococcus aureus  ATCC 6538 (kho¶ng 0,1 ml nhò dÞch tÕ bµo ®· pha lo·ng thÝch hîp). Hai èng cßn l¹i cÊy vµo mçi èng mét l­îng b»ng nhau chÕ phÈm cÇn kiÓm tra, vµ còng cÊy vµo mçi èng 100 tÕ bµo Staphylococcus aureus  ATCC 6538. §em ñ tÊt c¶ c¸c èng ë 30 - 35⁰C Ýt nhÊt  7 ngµy.

§èi víi nÊm mèc

Dïng 4 èng m«i tr­êng ph¸t hiÖn nÊm, mèc. Hai èng dïng lµm chøng chØ cÊy vµo mçi èng chøng nµy 100 tÕ bµo nÊm Candida albicans ATCC 10231. Hai èng dïng kiÓm tra, cÊy vµo mçi èng 100 tÕ bµo nÊm Candida albicans ATCC 10231 vµ mét l­îng chÕ phÈm b»ng nhau. §em ñ tÊt c¶ c¸c èng ë 20 - 25⁰C Ýt nhÊt 7 ngµy.

§¸nh gi¸ kÕt qu¶:

NÕu trong thêi gian ñ, vi khuÈn, nÊm mèc mäc tèt, (dÔ dµng vµ phong phó), ®èi víi tõng lo¹i, mäc gièng nhau gi÷a èng kiÓm tra vµ èng chøng: MÉu thö kh«ng cã t¸c dông øc chÕ.

NÕu trªn c¸c èng m«i tr­êng cã cÊy mÉu thö, vi khuÈn, nÊm, mèc mäc yÕu, chËm ph¸t triÓn hoÆc kh«ng ph¸t triÓn so víi èng chøng vÉn mäc tèt: MÉu thö cã t¸c dông øc chÕ. Ph¶i lo¹i bá t¸c dông øc chÕ.

T¸c dông øc chÕ cña mÉu thö cã thÓ lo¹i bá ®­îc mét c¸ch cã kÕt qu¶ b»ng c¸ch cÊy truyÒn nh¾c l¹i trªn mét lo¹t m«i tr­êng míi hoÆc läc qua mµng läc vi khuÈn.